株式会社ハイペップ研究所

研究開発の背景・研究目的及び目標

近年、ヒトゲノム解明に次いで、生物の持つ膨大な情報の解明にゲノム研究とプロテイン研究とはますます迅速高効率化が求められている。

産生するタンパク質の意義の解明や同定が盛んとなり、プロテオミクス研究において生体内のタンパク質を同定・機能解析することはバイオサイエンスのパラマウントである。

当該分野のブレークスルーのためには、古典的二次元電気泳動や高額な質量分析装置に依存しているプロテオーム解析を発展させる必要がある。生体機能において最も複雑で多様性の高いタンパク質検出に関しては、プロテインチップが提唱されているが、実用性のあるプロテインチップは未だ見られない。

そこで、軒原らは合成ペプチドをアレイとして用いたバイオチップを提唱した。
この独創的な発想はペプチドを機能特性別や立体構造別に種々デザイン(設計)し、多種のペプチドからなるライブラリーを構築し、機能の本質であるタンパク質・タンパク質間相互作用をミメティックさせるものである。

生物化学的見地からデザインした機能性ペプチド分子は、タンパク質よりも低分子なためデザインしやすく、これをアレイとして基板上に固定化し、そこで生化学的な反応を行い、分子認識を検出するためのチップを開発する。

本コンセプトによる合成ペプチドアレイは使用目的を特化することなく、生体機能を模した分子認識に関する検出の全てに応用できると考えられる。生体内で機能するタンパク質の同定・定量法の開発は、細胞機能解明のみならず、診断治療などでも重要なツールとなることはいうまでもない。

機能性ペプチドチップの応用によりタンパク質の同定・定量は迅速簡便となり効率は飛躍的に向上すると考えられる。本プロテインチップの応用は、研究目的は勿論のこと、診断や健康モニター、環境、食品検査など、幅広い分野で用いることができため、製品が上市されれば、その需要はきわめて大きい。

研究統括者である軒原と、その共同研究者である東京工業大学教授・三原は、デザインしたペプチドをアレイ上でタンパク質と認識させた時に得られる蛍光強度をパターン化し、各タンパク質に特有なパターンを得る手法(フィンガープリント法)を発明した。

この原理は、デザイン性に優れたペプチドをセンサー素子として用い、これらをアレイ化することにより、個々のペプチドとタンパク質の認識がDNAチップのように1対1ではなく、類似タンパク質の場合でも微妙な認識パターンの差を生じ、これによりタンパク質の同定、定量が可能となることを示したものである。

基盤技術開発の初期実験では100種程度のペプチドライブラリーによる結果であったが、アレイとするペプチドの種類を増加し、アミノ酸配列に工夫をし(デザイン)、またアレイ化法の工夫によって精度は向上することに確信を得た。

本アイデアと基礎検討の成果を“実用化”する目的で軒原はベンチャー起業をこころざし、株式会社ハイペップ研究所を設立した。越えるべきハードルはなお高く、作製するライブラリーの数も多いが、これまでの基礎検討で得た知見を生かし、また申請済みの特許を武器に、世界に類のない、低価格で扱いやすい次世代プロテインチップの実用的製造法を確立することを目標として本プロジェクトは進められた。

研究体制

(1)研究組織

株式会社ハイペップ研究所 京都本社
代表取締役 軒原 清史
住所:〒602-8158 京都市上京区下立売通千本東入中務町486-46
TEL:075-813-2101 FAX:075-801-0280
沖縄分室
株式会社ハイペップ研究所 沖縄ラボラトリー
〒904-2234 沖縄県うるま市字州崎12番75 沖縄健康バイオテクノロジー研究開発センター内
TEL&FAX:098-939-6980

株式会社ハイペップ研究所研究組織

(2)管理体制

株式会社ハイペップ研究所 管理体制

(3)研究者氏名及び人員

軒原 清史 (代表取締役兼最高科学責任者:研究統括)
大山 貴史 (主任研究員:ライブラリーの設計や最適化、蛍光標識化合物の最適化、チップ材料の検討および表面処理など)
川平 昇   (研究員:ライブラリー構築)
川上 博哉  (研究員:ライブラリー構築)
兒玉 由貴子 (研究員:ライブラリー構築)
宮里 苗子  (研究員:ライブラリー構築)
小野 則子  (研究員:蛍光標識化合物の最適化、ライブラリー構築)
鈴木 香苗  (研究員:簡易合成装置の開発、ライブラリー構築)
Sven Rasidi (研究員:ライブラリー構築)
宮島 翠  (研究員:ライブラリー構築)
新井 宣子  (研究員:ペプチド合成補助)
平田 晃義  (研究員:ライブラリー構築、チップ基板の検討、データマイニングの基礎検討)
荘厳 哲哉 (研究員:ライブラリー構築、蛍光検出法の検討)
中根 康雄  (研究員:手動合成装置の開発、分取装置の開発)
山室 光樹  (補助員:実験補助)


(4)外部からの指導・協力者名及び指導・協力事項

◎東京工業大学大学院 生命理工学研究科 生物プロセス専攻
    三原 久和 教授
             ライブラリーのデザイン、検出方法について
◎DKFZドイツ国立癌研究所 ペプチド部門長
    Dr. Ruediger Pipkorn
             効率的な大量分取法についての技術

成果概要

標識ペプチドライブラリー構築法の最適化に成功し、工業生産を可能とする手法を確立した。この最適化法を用いてこれまでに約2,500種のペプチド合成を実施し、この中からアレイに使用できるβ-ストランドライブラリー約450種、α-へリックスライブラリー約300種、β-ループペプチドライブラリー約500種を選定しアレイ製作用に分注した。

日本軽金属社と共同で基板材料の検討を行い、標識ペプチド固定化用チップ基板材料製造法を確立した。また、さらに、蛍光検出法を改良するためにピエゾ素子を用いたアレイヤーおよびCCDカメラによる蛍光顕微解析システムを導入した。

事業化に向けての課題及び今後の取り組み

① 工業製品生産に向けた表面化学の最適化
将来の製造へ向けて基盤表面処理法と化学的反応工程を最適化する。これによってより再現性の高い
低価格な(価格競争力の強い)製品の量産が可能となる。

② 工業製品生産のためのアレイ化法の最適化
将来の製造へ向けてスポッティング法を最適化する。これによってより再現性の高い価格競争力の
強いアレイ製造が可能となる。

③ 実用性の高い検出器の開発
現在DNAチップの検出を主目的としたレーザースキャナーが市販されているが極めて高価格であり、
バイオチップの普及の問題点の一つとなっている。本事業化計画案では将来、健康診断などへの普及を 目指しているため、低価格な、汎用簡易型の検出器が不可欠である。

④ 実サンプル(生体サンプル)を用いたデータマイニング
実際の生体組織・体液を用いたペプチドアレイによるデータマイニングを臨床医と共同で実施する。

⑤ アレイペプチドの改良と選別
上記共同研究によってアレイのペプチドデザインの改良を行い、フォーカスしたライブラリーのアレイ 化によってチップのサイズを縮小することで原価の引き下げを行い、価格競争力を高め、より優れた仕 様として製品競争力を高める。

⑥ データベースの作成
実サンプルを用いたデータマイニングを通じてデータベースを作成し、インターネットなどを介して測 定検出現場でリアルタイムに判定・診断が下せるようにする。

当該プロジェクト連絡窓口

株式会社ハイペップ研究所  新井 宣子(アライ ノリコ)
   住所: 〒602-8158 京都市上京区下立売通千本東入中務町486-46
   TEL: 075-813-2101
   FAX: 075-801-0280
   E-mail: arai@hipep.jp,info@hipep.jp